2017年大连大学分子生物学考研复试核心题库
● 摘要
一、名词解释
1． 穿梭载体（shuttle vector）
【答案】穿梭载体是指具有多个复制子能在两个以上的不同宿主细胞复制和繁殖的载体。
2． 转录单位（transcription unit）
【答案】转录单位是指从转录起始位点到转录终正位点所对应的、作为RNA 聚合酶模板的基因序列范围，可以是单一基因，也可以是多个基因。一个转录单位就是从启动子到终止子的一段序列，是一段以一条单链RNA 分子为表达产物的DNA 片段，这是转录单位的重要特征。
3． 感受态细胞（competent cell）
【答案】感受态细胞是指受体细胞经过一些特殊方法（如CaCL 等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA 的载体分子通过的细胞。
4． 同源重组（homologous recombination）
【答案】同源重组是指发生在DNA 的同源序列之间的重组，真核生物的非姐妹染色单体的交换，细菌的转化、转导和接合，噬菌体的重组等都属于这种类型。同源重组要求较大的DNA 片段进行交换它们的序列相同或接近相同。
5． Attenuator
【答案】弱化子。弱化子是指当操纵子被阻遏时，RNA 合成终止，起终止转录信号作用的核苷酸序列。弱化子 对于基因活性的影响是通过影响前导序列mRNA 的结构而发挥作用的，其调节作用的是某种对应氨酰-tRNA 的浓度，典型例子是细菌中的色氨酸操纵子。
二、简答题
6． 说出免疫共沉淀实验的原理与过程，比较酵母双杂交技术和免疫共沉淀技术在研究蛋
白质相互作用方面的优缺点。 【答案】（1）免疫共沉淀
①优点
a. 参与相互作用蛋白是天然状态；
b. 蛋白的相互作用是在自然状态下进行的；
c. 分离得到的蛋白复合物是天然状态的。
②缺点
a. 灵敏度不高，检测不到低亲和力和瞬时的蛋白质-蛋白质相互作用；
b. 相互作用的蛋白质需要第三者来连接；
c. 方法存在冒险性，必须根据实验预测结果选择检测抗体，若预测不正确，实验就得不到结果。
（2）酵母双杂交系统
①优点
a. 不用纯化蛋白质等繁琐步骤；
b. 结果真实性高，其在活细胞中进行；
c. 检测灵敏度高，可检测存在于蛋白质之间的微弱的和瞬时作用；
d. 可分析不同部位、不同细胞蛋白，可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA 文库来进行分析。
②缺点
a. 其蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等不能在核内无法进行；
b. 某些辅助蛋白限制了某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋白等的研究；
c. 存在着“假阳性”。
7． 简述原核生物DNA 的复制特点。
【答案】（1）原核生物双链DNA 都是以半保留方式遗传的，DNA 的复制在整个细胞周期都能进行;
（2）在复制起始、延伸和终止这三个阶段中主要的变化包括:双链的解开，RNA 引物的合成，DNA 链的延长，RNA 、引物的切除、填补缺口、DNA 片段的连接以及切除和修复错配碱基等;
（3）原核生物通常只有一个复制起点。
其复制起始点（OriC ）是含有3个13bp 的串联重复保守序列，以及4个由9bp 的保守序列组成的能结合DnaA 的起始结合位点;
（4）在起始点处解开形成复制叉，可以连续开始新的DNA 复制，一个复制单元多个复制叉，复制叉移动速度才良快;
（5）需要多种酶和蛋白质的协同参与，都涉及拓扑异构酶、解旋酶、单链结合蛋白、引物合成酶、DNA 聚合酶、连接酶等，DNA 聚合酶在组成和功能上与真核生物有很大的不同，原核的DNA 聚合酶III 复制时形成二聚体复合物，而真核的聚合酶保持分离状态;
（6）原核生物冈崎片段由DNA 聚合酶I 去除，以多联体的形式补齐末端，且原核生物的DNA 聚合酶I 具有5'-3' 外切酶活性。
8． 核糖体有哪些活性中心？
【答案】核糖体至少有5个活性中心：
（1）mRNA 结合位点
位于核糖体小亚基上，在肽基转移位点附近，其功能是结合mRNA 和IF 因子。
（2）A Α-tRNA 结合位点（A 位点）：
即氨酰基位点，即受位，主要位于大亚基，是接受氨酰-tRNA 的部位。
（3）肽基转移部位（P 位点）
即供位，或肽酰基位点，主要位于大亚基，是与延伸中的肽酰tRNA 结合位点。
（4）去氨酰-tRNA 释放位点（E 位点）
位于大亚基，是延伸过程中去氨酰-tRNA 的释放位点。
（5）转肽酶活性中心
位于P 位和A 位的连接处，是形成肽键的部位。
9． 如果一个基因与肿瘤的发生有关，如果设计实验以判断该基因是癌基因还是肿瘤抑制基因？
【答案】（1）检测该基因所表达蛋白在肿瘤组织中和正常细胞中的表达量。如果和正常组织相比，在癌细胞中该蛋白表达量很低甚至没有，该基因很可能是肿瘤抑制基因；如果先比之下癌组织中该蛋白高表达，则该基因是癌基因。
（2）进一步实验：敲除该基因在正常细胞系中的表达或抑制该基因表达，观察细胞转化的效果，与肿瘤组织进行比较分析。如果该基因被抑制以后，细胞分裂性增强，可初步确定该基因为肿瘤抑制基因；若减弱分裂则确定是癌基因。
10．什么是套索状结构? 哪些类型RNA 的剪接中会形成该结构?
【答案】（1）套索状结构是在真核生物RNA 前体加工过程中，切除内含子时，通过2' ，5'-磷酸二酯键形成的一种带尾巴的环形中间结构。
（2）主要在前体mRNA 的剪接过程中会形成该结构。
11．分别说出5种以上RNA 的功能。
【答案】RNA 的种类及各自的生理功能如表:
表 RNA 的种类及各自的生理功能
三、论述题
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