● 摘要
摘要:多糖是中药中一类天然高分子化合物,是维持生命正常运转的基本物质之一,具有调节免疫系统功能、抗氧化以及抗衰老等作用,具有巨大的开发潜力。丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇型科鼠尾草属植物,以根及根茎入药,为我国传统的名贵中药材。有关丹参化学成分的研究已有不少报道,但对其多糖成分的研究较少。
本论文以丹参为材料,研究了丹参多糖的提取、分离及纯化工艺,采用苯酚-硫酸法测定了丹参不同部位总多糖的含量,用HPLC法测定了丹参不同部位多糖的单糖组成和含量,并研究了多糖对质粒DNA的保护作用。主要实验结果如下:
(1)采用无水乙醇回流脱脂,热水回流提取,提取液经80%乙醇沉淀,即得水溶性粗多糖,粗多糖复溶于水后,以Sevage试剂法和反复冻融法相结合去除蛋白,透析去除小分子杂质,然后冷冻干燥得丹参多糖。
(2)采用苯酚-硫酸法测定丹参总多糖的含量,结果显示,葡萄糖在0.01-0.1mg范围内线性关系良好,回归方程为y=9.6584x-0.0395(r=0.9992,n=6)。结果表明,方法精密度高,重现性好,可用于丹参总多糖的含量测定。
(3)以丹参的不同部位为材料,对其总多糖的含量进行比较。结果显示,总多糖含量根为18.66%,茎为1.20%,叶为1.14%,花为4.59%,种子为0.75%,总多糖在上述5个部位中的分布比例为24.88:1.60:1.52:6.12:1。表明不同部位样品中总多糖含量存在较大差异。
(4) 建立了HPLC同时分析8种单糖的方法,其色谱条件为检测波长:250nm;柱温:40℃;流速:1.0mL/min;溶剂A:15%(V/V)乙腈+0.05mol/L磷酸缓冲液(KH2PO4-NaOH,pH6.9);溶剂B:40%(V/V)乙腈+0.05mol/L磷酸缓冲液(KH2PO4-NaOH,pH6.9);梯度模式:时间梯度为:0→5→10→60min,相应浓度梯度为10%→11.6%→14%→20%溶剂B。方法学考察结果表明,此法重现性好,精密度高,可做为8种单糖的同时分析方法。
(5)用HPLC法分析了不同部位多糖的单糖组成,并对其所含单糖的含量和摩尔比进行计算。结果表明:丹参多糖的单糖组成和含量在不同部位中有较大差异。根、茎、叶和花四个部位多糖的单糖组成相同,含Man,Rha,GlcUA,GalUA,Glc,Gal和Ara等7种单糖。而种子中则含Man,Rha,GlcUA,GalUA,Glc,Xyl和Ara等7种单糖。
(6)通过丹参多糖水溶液对H2O2光解反应诱导质粒DNA损伤的保护作用的研究,确定了最适反应浓度,并比较了不同部位多糖的保护效果。结果表明丹参根、茎和叶多糖对质粒DNA均有明显的保护作用。