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一、名词解释

1． 谷氨酷基循环（γ-glutamyl cycle）。 【答案】谷氨酰基循环是一种组织摄取氨基酸的转运机制。氨基酸在小肠内被吸收，其吸收及向细胞内转运过程是通过谷胱甘肽起作用的，首先是谷胱甘肽对氨基酸的转运，其次是谷胱甘肽的再合成，此称谷氨酰基循环。

2． 蛋白质工程（protein engineering）。

【答案】蛋白质工程又称第二代基因工程，1981年由美国基因公司Ulmer 提出，是指通过对

蛋白质分子结构的合理设计，利用基因工程手段生产出具有更高活性或独特性质的蛋白质的过程。

3． 原癌基因

【答案】原癌基因，又称转化基因，是指人类或其他动物细胞（以及致癌病毒）固有的一类基因。它们一旦活化便能促使人或动物的正常细胞发生癌变。

4． DNA 重组（DNA recombination ）。

【答案】DNA 重组是指发生在DNA 分子内或DNA 分子之间核苷酸序列的交换、重排和转移现象，是已有遗传 物质的重新组合过程。

5． 胞吐（作用）。

【答案】胞吐是指分泌的物质被包裹在脂囊泡内，与质膜融合，然后将物质释放到细胞外空间的过程。

6． 酸中毒。

【答案】人体在某些特殊的情况下（如:饥饿或糖代谢障碍），三羧酸循环不能正常进行，机体所需的能量只能由脂肪酸分解来供给，这样就产生了大量的酮体，当酸性的酮体进入血液后，就引起了血液的pH 过分下降，从而造成酸中毒。

7．

【答案】是指在标准条件下（一般定为0.18mol/L阳离子浓度，400核苷酸长的片段）测得的复性率达0.5时的Cot 值

8． 磷酸戊糖途径。

【答案】磷酸戊糖途径是指细胞质中，由6-P-葡萄糖直接氧化脱羧生成

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核酮糖，并进一步单糖磷酸酯互变，再生6-P-葡萄糖的过程。

二、问答题

9． 外源基因导入动物细胞有哪些常用方法？

【答案】常用的方法有：（1）磷酸钙共沉淀法，用沉淀磷酸离子和DNA , 沉积在细胞质膜上的DNA 被细胞吸收，可能是通过吞嗤作用；（2） DEAD 葡聚糖（DE-AE-dextron ）或聚阳离子（polycation ）法，它能结合DNA 并促使细胞吸收；（3）脂质体（liposome ）法，利用类脂经超声波、机械搅拌等处理，形成双脂层小囊泡， 将DNA 溶液包裹在内，它通过与细胞质膜融合而使DNA 进入细胞；（4）脂质转染法，用人工合成的阳离子类 脂与DNA 形成复合性，借助类脂穿过质膜而将DNA 导入细胞内；（5）电穿孔法，在脉冲高压电场作用下质膜 瞬间被击穿，DNA 得以进入细胞，细胞膜随即修复正常；（6）显微注射法，对哺乳动物受精卵等较大的细胞，导入外源DNA 可以用显微注射法，即在显微镜下，用极细的玻璃注射器针头

枪射击动物的表皮、肌肉和 乳房等获得成功的例子也有报道。

在以上诸方法中，磷酸钙共沉淀法成本低、操作方便，但效率低；脂质转染法和电穿孑1法，前者需要昂贵的试剂，后者需要特殊的仪器，但效率高，现在较常用。显微注射法效率极高，还可直接将DNA 送入核内，但 需要昂贵仪器，且技术复杂不易掌握。

10．凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建筑在分子大小的基础上，而且两种方法均采用交联的多聚物作为支持介质，为什么在凝胶过滤时，相对分子质量小的蛋白质有较长的保留时间，而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它又“跑”得最快？

【答案】凝胶过滤常用的是葡聚糖凝胶（Sephadex ），这凝胶颗粒的交联介质排阻相对分子质量较大的蛋白质，仅允许相对分子质量较小的蛋白质进入颗粒内部，所以相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶颗粒之间的空隙中通过。这意味着它通过柱的体积为床体积减去凝胶颗粒本身所占的体积。而相对分子质量小的蛋白质必须通过所有的床体积才能流出，所以，相对分子质量小的蛋白质比相对分子质量大的蛋白质有较长的保留时间。而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其凝胶介质并不存在像Sephadex 那样的颗粒之间的空隙。所以，所有的蛋白质分子必须全部通过这交链介质而移动。蛋白质的相对分子质量越小，通过这介质就越快，移动得越迅速。

11．请简要描述反义RNA 调控基因表达的基本机制。

【答案】反义

译的直接抑制或与靶翻译功能。可能是反义调控基因表达的基本机制分为三类。 直接作用于其靶分子对的SD 序列和（或）编码区，引起翻酶的敏感性增加，使其降解。 的结合后引起该双链与与靶（1）转录前调控：

这类反义（2）转录后调控：反义插入细胞内并注入DNA 溶液；（7）基因枪（genegun ）法，在动物转基因中使用相对较少，用基因的SD 序列的上游非编码区结合，从而抑制靶的上游序列结合后会引起核糖体结合位点区域的二级结构发生改变，因而阻止了核糖体的结合。

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（3）复制前调控：反义可直接抑制靶的转录。

12．从蛋白质的一级结构可预测它的三维结构，下面是一段肽链的氨基酸序列：

（1）基于以上的氨基酸序列，预测将会在何处形成弯折（bend ）或转角

（2）何处形成链内二硫键？

（3）假定此序列是一个较大的球状蛋白质分子中的一部分，指出以下氨基酸残基：D 、I 、T 、A 、Q 、K 的可能位置（在蛋白质的表面还是内部），并解释其原因。

【答案】（1）弯折（bend ）最可能出现在7位和19位，即脯氨酸残基处，在顺式构象中的脯氨酸残基伴随着转角（turn ）。

（2）在13位和24位的半胱氨酸残基之间可以形成二硫键。

（3）极性和带电荷的氨基酸残基如D 、Q 、K 位于球状蛋白质分子的表面，而非极性氨基酸残基如A 、I 位于球状蛋白质的分子内部。苏氨酸（T ）虽然有极性，但是在水中极性接近零，所以它在蛋白质分子的表面和内部都可以发现。

13．简述酶法测定DNA 碱基序列的基本原则。

【答案】酶法测序的基本原理是把DNA 变成在不同碱基的核苷酸处打断的四套末端标记的DNA 片段，每套DNA 片段打断的位置位于一种特异碱基。例如：一个具有pAA TCGACT 的DNA 顺序，如果一个反应能使DNA 在C 处打断就会产生pAA TC 和pAATCGAC 两个片段；一个能在G 处打断的反应仅产生pAATCG —个片段，因此产生的片段大小决定于碱基所处的位置。当相应于四个不同碱基产生的四套DNA 片段并排进行电泳分离时，它们产生一个可以直接读出DNA 顺序的梯形区带，即与被分析链互补的DNA 链。根据碱基互补配对规律，就可以得出被测DNA 链的顺序。

14．蛋白质工程与基因工程的区别是什么？

【答案】基因工程要解决的问题是把天然存在的蛋白质通过克隆基因大量地生产出来；

蛋白质工程则致力于对天然蛋白质的改造，制备各种定做的新蛋白质。蛋白质工程是按照以下思路进行的：确定蛋白质的功能→蛋白质应有的高级结构→蛋白质应具备的折叠状态→应有的氨基酸序列→应有的碱基排列，可以创造自然界不存在的蛋白质。

15．在突变的大肠杆菌中下列基因的缺失将产生什么结果？

乳糖操纵子调节基因缺失；

色氨酸操纵子调节基因缺失。

【答案】（1）lac 调节基因缺失的突变体不能编码有活性的阻遏蛋白，使乳糖操纵子变为组成型的。

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