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一、名词解释

1． TATA 框

【答案】TATA 框是指位于基因转录起始点上游-30p~-25bp（真核）或-10bp （原核）的一段保守性较高的序列，控制转录起始的准确性和频率，因共有序列为TATAAAA 而得名。

2． MissenseMutation

【答案】错义突变。错义突变是指DNA 分子中碱基对的取代，使得mRNA 的某一密码子发生变化，由它所编码的氨基酸基变成另一种的氨基酸，使得多肽链中的氨基酸序列也相应的发生改变的突变。

3． 等电聚焦

【答案】

等电聚焦 是指利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性pH 梯度中进行蛋白质的分离和分析的技术。

4． Attenuator

【答案】弱化子。弱化子是指当操纵子被阻遏时，RNA 合成终止，起终止转录信号作用的核苷酸序列。弱化子 对于基因活性的影响是通过影响前导序列mRNA 的结构而发挥作用的，其调节作用的是某种对应氨酰-tRNA 的浓度，典型例子是细菌中的色氨酸操纵子。

5． 编码链（coding strand）

【答案】编码链是指DNA 双链中含编码蛋白质序列的那条链，与模板链互补，也称有义链（sensestrand ）或正链。其序列与信使核糖核酸相同，只是信使核糖核酸中的U （尿嘧啶）组成与编码链中的T （胸腺嘧啶）组成相区别。

二、简答题

6． 简述双向电泳研究蛋白质组的优缺点。

【答案】（1）优点: ①双向电泳技术，特别是固相pH 梯度等电聚焦为第一向的双向电泳技术是当前分辨率最高，信息 量最大的电泳技术。目前，一次双向电泳最高可达11000个蛋白点的分辨率；

②双向电泳能将组织和细胞中成千上万种蛋白高分辨，高灵敏的分离以满足随后的质谱分析，结合质谱鉴定 技术可査明大型蛋白复合物各组分，与其他生物技术相结合，可以快速准确地发现和鉴定新的蛋白质。

（2）缺点:

①低拷贝蛋白质的鉴定受限；

②极酸或极碱蛋白的分离比较困难； ③分子质量极大或极小蛋白的分离较难；

④难溶蛋白的检测比较困难；

⑤由于蛋白多样性的存在，很难确定一张正常状态的图谱作为病理状态的对照；

⑥重复性仍然不理想；

⑦得到高质量的双向凝胶电泳需要精湛的技术。

7． PCR 技术的基本原理、步骤和应用。

【答案】PCR 技术是根据天然DNA 的复制机制在体外通过酶促反应有选择地大量扩增（包括分离）一段目的基因的技术。

（1）PCR 技术的基本原理：DNA 聚合酶以单链DNA 为模板，借助一小段双链DNA 来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA 模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环 境下，DNA 聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物

为起始点，沿模板方向延伸，合成一条新的DNA 互补链。

（2）PCR 由变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA 的变性：模板DNA 经加热至93°C 左右一定时间后，使模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双 链DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②模板DNA 与引物的退火（复性）：模板DNA 经加热变性成单链后，温度降至55°C 左右，引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA 模板-引物结合物在TaqDNA 聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板， 按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制

链。重复循环变性三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可

2〜3h 就能将待扩目的基因扩増放大几百万倍。 成为下次循环的模板。每完成一个循环需2〜4min ，

（3）PCR 的应用主要是以下几个方面：

①科学研究：基因克隆；DNA 测序；分析突变；基因重组与融合；检测基因的修饰；鉴定与调控蛋白质结 构的DNA 序列；转座子插入位点的绘图；合成基因的构建；构建克隆或表达载体；检测某基因的内切酶多态性 等。

②临床诊断：细菌；病毒；螺旋体；支原体；衣原体；立克次氏体；分枝杆菌等病原体的鉴定；人类遗传病 的鉴定；诊断遗传疾患，以及监测临床标本中病原体的核酸序列。

③对法医学标本做遗传学鉴定。

④分析激活癌基因中的突变情况。

⑤生成克隆化双链DNA 中的特异序列作为探针。

末端，并以此

8． 真核mRNA 有哪些转录后修饰事件？详细叙述大部分真核mRNA 3'端的修饰过程。

【答案】（1）真核mRNA 转录后修饰事件有：

①5' 端形成特殊的帽子结构；

②在链的Y 端切断并加上多聚腺苷酸poly （A ）尾巴；

③通过拼接去除内含子转录而来的序列；

④链内部核苷被甲基化；

⑤发生RNA 编辑和再编码。

（2）大部分真核mRNA 31端的修饰过程：首先由核酸内切酶切开mRNA 3'端的特定部位，然后由poly （A ） 合成酶催化多聚腺哲酸反应，加入poly （A ）尾巴。加poly （A ）位点上游10~35个核苷酸处有AAUAAA 序列，下 游约50核苷酸处有富含GU 序列，这两处序列是剪切和加poly （A ）所需的信号。首先由剪切和聚腺苷化特异因 子（CPSF ）结合到上游富含AAUAAA 序列，剪除刺激因子（CSF ）与下游富含GU 序列作用，剪除因子（CF ） I 、II 相继与之结合，使其更趋稳定。在剪除之前，poly （A ）聚合酶结合到复合物上，使剪切后游离的能迅速 腺苷酸化。

9． 蛋白质实验原理与主要步骤。

【答案】（1）实验原理

利用与GST 融合蛋白质探针蛋白质亲和结合，从可溶性蛋白质库中纯化一个未知蛋白质，再

通过GST 与谷 胱甘肽偶联的琼脂糖球珠的结合收集相互作用蛋白质，从而分离出蛋白质复合物。

（2）主要步骤

① GST 融合蛋白先与下列蛋白溶液之一孵育（a. 单一明确的重组蛋白；b. 细胞裂解蛋白混合液；c. 体外 翻译cDNA 表达得到的未知蛋白）；

②混合液与谷胱甘肽琼脂糖球珠在4°C 反应2h ，离心得沉淀；

③沉淀加入2 X蛋白Loading Buffer煮沸，离心，取上清进行SDS-PAGE 电泳；

④考马氏亮兰对SDS-PAGE 胶进行染色，观察特异沉降的蛋白带，接着进行质谱分析确定沉降的蛋白；

⑤电泳后的胶做Western Blot来确定沉降的蛋白中是否有目的蛋白。

10．解释大肠杆菌半乳糖操纵子的两启动子调控机制。

【答案】（1）半乳糖操纵子结构：大肠杆菌半乳糖操纵子包括3个结构基因

它们分别编码3种酶，这3个酶的作用是使半乳糖变成葡萄糖-1-磷酸。该操纵子存在两个相距仅5bp

的启动子和

接毗邻。

（2）两启动子调控机制：从&起始的转录只有在培养基中无葡萄糖时，才能顺利进行，RNA

CAP 和较高浓度的cAMP 。US2起始的转录则完全依赖于葡萄糖，聚合酶与S 1的结合需要半乳糖、

其mRNA 可从两个不同的起始点开始转录；它也有两个操纵基因在基因gal 内部；

无论是还是和0E 在上游，位于CAP 位点之内，离启动子都有一段距离，不直