● 摘要
柿叶为柿树科落叶乔木植物柿Diospyros kaki L. f .的新鲜或干燥叶片。柿叶中的主要有效成份为黄酮类化合物[1],同时还含有其他化学成份,如萘醌类、三萜类、香豆素类和单宁酸等。经研究表明,柿叶黄酮主要用于止血、降压、抗菌消炎、治疗冠心病、心绞痛及胃溃疡出血、肺结核出血、功能性子宫出血等内脏出血病症[2,3]。
本论文包括综述和研究报告两部分。
第一部分:综述
1.柿叶研究进展
从柿叶有效活性成份、药理活性、开发利用状况等方面对柿叶的研究进行综述。
2.黄酮类化合物的研究进展
从黄酮类化合物的理化性质、生物活性、提取等方面进行综述。
3.表面活性剂提取天然产物的研究
主要阐述表面活性剂萃取天然产物研究概况。
4.天然产物抗肿瘤作用的研究进展
从天然产物抗肿瘤的作用机制及几种主要的抗肿瘤活性成份的研究概况进行综述。
第二部分:研究报告
1. 柿叶总黄酮提取条件的优化及萃取动力学研究
柿叶经清洗晾干后粉碎,用石油醚回流脱脂和除去叶绿素。然后分别用水、甲醇、乙醇和不同分子量的聚乙二醇水溶液为溶剂,微波辅助萃取柿叶黄酮。以柿叶中两种具有代表性的活性物质槲皮素和山萘酚的峰面积为响应指标,进行高效液相色谱分析。结果表明,聚乙二醇-200的提取效率高于水、甲醇及乙醇,而且聚乙二醇的分子量大小对提取效率也有一定影响。结果表明,聚乙二醇的分子量越大,提取效率越低。所以选择聚乙二醇-200为提取溶剂进行下一步的实验。
在单因素的基础上,采用响应面优化法(RSM)确定初步优化的提取条件:微波功率527.47 W,液料比16.89:1 mL/g,聚乙二醇-200浓度56.56%。考虑到实际操作的便利,将提取工艺参数修正为微波功率525 W,液料比17:1 mL/g,PEG-200浓度60%。然后,在最佳提取工艺条件下,对柿叶黄酮的萃取动力学进行了初步研究。结果发现,随着提取时间的延长柿叶总黄酮、槲皮素和山萘酚的含量出现了先增长后下降的趋势。因此,在微波辅助萃取黄酮类化合物应适当控制萃取时间,不宜太长。一般情况下,提取20 - 25 min柿叶中的黄酮类化合物基本可以达到最大提取效率。
通过以上实验得到聚乙二醇-200结合微波辅助萃取柿叶黄酮的最佳提取工艺条件为:60%聚乙二醇-200,液料比17:1 mL/g,在525 W功率下提取20 min。在该条件下,柿叶提取物中槲皮素、山萘酚和总黄酮的含量分别为1.196 ± 0.045 mg/g、0.643 ± 0.106 mg/g、16.90 ± 0.064 mg/g。最后通过与聚乙二醇-超声辅助萃取、乙醇-微波辅助萃取和乙醇-超声辅助萃取三种提取方法比较发现,聚乙二醇-微波辅助萃取提取效率最高,且溶剂消耗量少,提取时间短。
2. 柿叶黄酮体外抗肿瘤活性研究
通过利用MTT法检测柿叶黄酮提取液对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用。结果表明,柿叶黄酮对Hela细胞的生长具有明显的抑制作用,而且对Hela细胞的抑制作用与时间之间的存在依赖关系。随着培养时间的延长,提取液对Hela细胞的抑制作用逐渐减弱,由此推断,培养时间对柿叶黄酮提取液抑制Hela细胞增殖有一定影响。本实验为进一步开发利用柿叶的药用资源和开发抗肿瘤药物具有一定的参考价值。
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