● 摘要
石榴皮多酚是石榴中重要的生理活性成分，具有抗氧化、抗癌、抗菌、降血脂等多种生物学功能。本文以石榴鞣花酸、安石榴苷和石榴皮多酚纯化物为受试物，利用体外培养成人正常肝细胞L-02为研究对象，采用油红O染色观察肝细胞内脂滴情况，qRT-PCR检测分析对肝细胞胆固醇合成相关基因HMGCR mRNA、SE mRNA、LDLR mRNA和SREBP-2 mRNA的表达水平的作用影响，探究石榴皮多酚及其主要成分对肝细胞胆固醇合成影响及其分子机制。 主要研究成果如下： (1)建立了脂肪变性肝细胞模型：通过油红O染色法定性观察脂滴形成、试剂盒测定上清液中肝脂酶变化，结果表明，采用造模培养液对成人肝细胞L-02孵育48h，能够成功构建脂肪变性肝细胞模型，细胞内脂滴数量显著增加，细胞培养液内转氨酶活性升高。 (2)采用MTT法确定了石榴皮多酚对治疗和预防作用的适宜浓度范围为0~100μg/mL。 (3)初步确定了石榴皮多酚对胆固醇合成的作用影响及其分子机制： ①石榴鞣花酸、安石榴苷、石榴皮多酚纯化物均能减少细胞内脂滴形成。对比石榴皮多酚治疗组和预防组结果显示，预防组肝细胞内脂滴数量要比治疗组少一些，说明石榴皮多酚在降胆固醇作用方面预防效果更佳。 ②实时荧光定量结果表明，与正常组比较，石榴皮多酚三种受试物均可使胆固醇合成关键酶HMGCR和SE基因表达调控至较低水平，对LDLR mRNA和SREBP-2 mRNA表达则有明显的上调作用。治疗组中，对HMGCR mRNA的表达水平调控作用的强弱依次为安石榴苷>石榴皮多酚纯化物>石榴鞣花酸，对SE mRNA的表达水平调控作用的强弱依次为石榴皮多酚纯化物>安石榴苷>石榴鞣花酸；对LDLR mRNA和SREBP-2 mRNA表达水平上调的作用强弱依次为石榴鞣花酸>石榴皮多酚纯化物>安石榴苷。预防组中，石榴皮多酚对胆固醇关键限速酶HMGCR mRNA和SE mRNA表达调控作用强弱依次为：石榴鞣花酸>石榴皮多酚纯化物>安石榴苷；石榴皮多酚对LDLR mRNA和SREBP-2 mRNA表达调控作用强弱依次为石榴鞣花酸>石榴皮多酚纯化物>安石榴苷。说明三种石榴皮多酚受试物，均可调控胆固醇合成关键酶调节至比正常组较低表达水平，从而降低肝细胞内胆固醇合成，同时，可上调肝细胞LDLR基因及其上游基因SREBP-2，从而提高肝细胞对胆固醇的内吞清除能力。总体上，预防组对肝细胞胆固醇合成及清除的调控作用优于治疗组。