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一、名词解释

1． 稀有密码子（rare codon）。

【答案】稀有密码子是指不同生物体对编码同一种氨基酸的不同密码子（同义密码子）的使用频率比较低的密码 子。

2． 脂肪肝（fatty liver）。

【答案】脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。肝脏被脂肪细胞所浸渗，变成了非功能的脂肪组织。脂肪肝可能因糖尿而产生；膳食中缺乏甲硫氨酸和胆碱而造成的脂蛋白合成的减少，其结果也会导致脂肪肝。

3． 糖的有氧氧化（aerobic oxidation）。

【答案】糖的有氧氧化是指葡萄糖或糖原在有氧条件下氧化成水和二氧化碳的过程。是糖氧化的主要方式。

4． 底物水平磷酸化。

【答案】底物水平磷酸化是指在底物被氧化的过程中，底物分子内部能量重新分布产生高能磷酸键（或高能硫酯键），由此高能键提供能量使ADP （或GDP ）磷酸化生成A TP （或GTP ）的过程。

5． 三羧酸循环。

【答案】三羧酸循环又称柠檬酸循环、Krebs 循环（Krebs cycle），是指在有氧条件下，在线粒体中，用于乙酰CoA 中的乙酰基氧化生成反应是由乙酰

6． 核酸。 和的酶促反应的循环系统，该循环的第一步和草酰乙酸缩合形成柠檬酸。

【答案】核酸是指由单核苷酸通过磷酸二酯键相连而组成的高分子化合物称。它可以分为DNA 和RNA 两类。

7． zinc finger。

【答案】Zincfinger （锌指结构）最早发现于转录因子TF^IA，为5SrRNA 基因转录所必需，是反式作用因子DNA 结合结构域中的一种基序结构，含一至多个重复单位。每一锌指单位约有30个氨基酸残基，形成一个反向平行

基和螺旋上两个组氨酸残基与发夹，随后是一个

第 2 页，共 27 页 螺旋，由片层上两个半胱氨酸残构成四面体配位结构。另一种类型是在其DNA 结合结构域

中，两个锌簇，每个锌离子与四个半胱氨酸残基构成四面体结构。其中，螺旋上的氨基酸残基参与识别不同的DNA 。

8． 盐析。

【答案】盐析是指在蛋白质溶液中加入大量中性盐而使蛋白质沉淀的现象。这是由于大量的盐离子可与蛋白质竞争溶液中的水分子，从而破坏蛋白质颗粒表面的水化层，失去水化层的裸露的蛋白质分子易于聚集而沉淀。

二、问答题

9． 用AgN03对在10ml 含有l.Omg/ml蛋白质的纯酶溶液进行全抑制，需用

该酶的最低相对分子质量。

【答案】10ml 酶液中含纯蛋白质

：设该酶最低分子质量为2,

则

所以，该酶的最低分子质量为 求

10．与真核细胞的其他蛋白质基因相比，组蛋白的基因的结构具有一些不同寻常的性质，比如基因的拷贝数属于中等拷贝、基因无内含子以及它的成熟的mRNA 无polyA 尾巴，你认为这些性质对于组蛋白合成的特殊要求具有什么样的优势。

【答案】组蛋白的合成与DNA 的复制是高度同步的，都集中在细胞周期的S 期。在合成以后两者要组装成核小体的结构，这需要在较短的时间内合成大量的组蛋白。组蛋白基因的结构所具有的一些不同寻常的性质，如基因的拷贝数属于中等拷贝、基因无内含子以及它的成熟的mRNA 无polyA 尾巴等都有益于它在短时间内得到大量 拷贝的成熟mRNA 。

11．mRNA 、tRNA 、rRNA 在蛋白质生物合成中各具什么作用？

【答案】在蛋白质合成中，（1）mRNA 作为合成的模板；（2）tRNA 作为转运工具；（3）rRNA 和蛋白质结合的核糖体作为蛋白质合成部位。

12．如果用尿嘧啶-N-糖苷酶缺陷的大肠杆菌菌株（ung-）或dUTPase 缺陷的大肠杆菌菌株（dut-）

重复冈 崎利用[H]-脱氧胸苷所做的脉冲标记和追踪实验，实验结果会有什么变化？请解释原因。

【答案】冈崎实验得到的DNA 标记片段不仅包括由于后随链不连续合成产生的冈崎片段，还包括由于dUTP 的参入而诱发细胞内的碱基切除修复系统切开DNA 链产生的DNA 片段。如果用缺陷的大肠杆菌菌株重复同崎实验，则参入的U 不能被尿嘧啶-N-糖苷酶识别并切去尿嘧啶碱基，不会产生对内切核酸酶敏感的无碱基位点，因而实验只能得到由于后随链不连续合成产生的网崎片段，标记的DNA 片段数量减少。

如果用dUTPase 缺陷的大肠杆菌菌株重复冈崎实验，则细胞内的dUTP 不会被dUTPase 水解而含量増加，有更多的U 参入正在合成的DNA 中，因而实验中得到的由于dUTP 的参入而产生的DNA 片段将增加， 加上由于后随链不连续合成产生的冈崎片段，标记的DNA 片段数量将増加。

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13．依序写出三羧酸循环中的酶。

【答案】柠檬酸合酶、乌头酸酶、异柠檬酸脱氢酶、酮戊二酸脱氢酶系、玻珀酰

琥珀酸脱氢酶、延胡索酸酶、苹果酸脱氢酶。

14．脂肪酸的生物合成需要哪些原料？它们从何而来？

【答案】（1）脂肪酸合成中所需的碳源完全来自乙酰CoA ，包括作为酰基受体的酰基载体蛋白和作为乙酰基供体的丙二酸单酰基辅酶A 和其本身。乙酰CoA 可以由线粒体中的丙酮酸氧化脱羧、氨基酸氧化降解以及长链脂肪酸P-氧化形成。同时，乙酰CoA 可进入TCA 彻底氧化分解，也可用于糖、氨基酸和脂肪等的合成。乙酰辅酶A 在脂肪酸生物合成中的作用是提供脂肪酸合成所需的前体。

（2）脂肪酸合成中所需的还原剂是NADPH ，其60%来自于PPP 途径，其余的来自于酵解中生成的NADH ，经苹果酸脱氢酶和苹果酸酶转化而来。

合成酶、

三、论述题

15．基因文库的构建有哪几个基本步骤？

【答案】构建基因文库的步骤包括：

（1）染色体DNA 的片段化：从生物组织中提取染色体DNA 并将其切割成一定大小的片段，以便插入入噬菌体载体。

（2）载体DNA 的制备：选择适当的噬菌体载体或柯斯质粒DNA ，用限制酶切开，以便与染色体DNA 片段连接。

（3）体外连接与包装：将染色体DNA 片段与载体DNA 片段用T4DNA 连接酶连接，然后重组体DNA 与噬菌体包装蛋白在体外进行包装。

（4）重组噬菌体感染大肠杆菌：将X 噬菌体载体与外源DNA 连接和包装得到的重组噬菌体，用以感染大 肠杆菌。重组体DNA 在大肠杆菌细胞内经增殖并裂解宿主细胞，产生的溶菌产物组成重组噬菌体克隆库，即基因文库。柯斯质粒具有更大的容载外源DNA 的能力，它虽然也能包装成噬菌体类似的颗粒并按噬菌体感染的方 式将重组DNA 导入大肠杆菌细胞，但载体中已将噬菌体増殖和裂解的基因删除，重组体DNA 进入宿主细胞后 只能以质粒的形式存在和复制，不能再包装成噬菌体颗粒。因此，由柯斯质粒构建的基因文库是以细菌克隆组成 的，而不是噬菌体克隆库。

（5）基因文库的鉴定和扩增：构建得到的基因文库应测定其库容量，即库中包含的克隆数，通常以噬菌斑 形成单位或菌落形成单位（colonyformingunit ，cfu ）来表示，前者指重组嗤菌体克隆数，后者指含重组体DNA 的细菌克隆数。对于文库的鉴定，可以通过随机挑选一定数量的克隆，用限制酶酶切、PCR 或其他方法分析其重组体DNA 来进行。

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