题目：成药中乌头类生物碱含量测定方法及铁牛七化学成分研究

毛茛科（Ranunculaceae）乌头属（Aconitum L.）为多年生草本植物，是一类具有广阔开发前景的药用植物资源。乌头属植物大多数为民间药用植物，代表性的药用植物乌头、草乌、附子均为我国药典所收录，近年来，铁棒锤和雪上一支蒿也常作为要药用于成药制剂中。陕西太白山上生长的铁棒锤（Aconitum szechenyianum Gay.）又名铁牛七，是陕西民间常用的道地草药，中药常以其根入药，性热，味辛苦，有大毒，具有活血祛瘀、祛风除湿、消肿败毒、兴奋精神、消炎镇痛等功效。由于乌头属药材的主要有效成分为剧毒的双酯型生物碱，而且治疗剂量与中毒剂量十分接近，为确保临床用药安全有效，国内外学者在成药内在质量的客观评价方法方面做了大量工作，并已制定了一些切实可行的质量控制指标。但采用HPLC同时测定含有乌头属药材的成药中四种乌头类生物碱含量未见报道，而关于铁牛七化学成分的研究也不多见。本论文旨在通过对上述内容的研究，为乌头属成药及铁牛七药材临床应用的安全有效提供参考方法。
本论文包括引言和研究报告两部分内容
第1章 引言
1.1 乌头属植物及其成药测定的研究现状
包括乌头属药材的化学成分、临床应用、毒性以及成药中乌头类生物碱的测定方法等4部分内容。
1.2 铁棒锤及生物碱的研究概况
包括铁棒锤的化学成分、药理作用、毒性，生物碱的性质与分类、提取，以及乌头类生物碱的研究应用及发展方向等。
第2章 研究报告
分为三个部分：HPLC同时测定成药中四种乌头类生物碱含量；铁牛七中宋果灵的提取及测定；亲脂性有机溶剂提取分离铁牛七化学成分。
2.1 HPLC同时测定成药中四种乌头类生物碱含量
我们选择了几种具有代表性的市售常用中成药、藏药和蒙药（均含有乌头属药材）为研究对象，优化其中生物碱的提取条件，然后利用高效液相色谱-二极管阵列检测器外标法进行宋果灵、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱四种乌头类生物碱的同时测定。四种生物碱的线性范围分别为0.1~1.5 µg (r = 0.9996)，0.1~2.0 µg (r = 0.9995)，0.1~3.0 µg (r = 0.9996) 和 0.1~2.5 µg (r = 0.9997)。实验中考察了四种生物碱测定的精密度、重复性、稳定性及样品的加标回收率。结果表明，此法精密度高，重复性和稳定性好，样品加标回收率也较高，适用于中成药万通筋骨片、附子理中丸，藏药安神丸和蒙药嘎日迪五味丸中四种乌头类生物碱的同时测定，为含有乌头属药材的成药药品质量控制提供了参考方法。
2.2 铁牛七中宋果灵的提取及测定
我们考察了传统溶剂回流和微波辅助提取两种提取方法对铁牛七中宋果灵提取率的影响。首先采用传统溶剂回流法，考察了浸泡时间对宋果灵提取率的影响；然后利用交互实验考察了3种提取溶剂和8种浸泡溶酶对提取率的影响；在此基础上又考察了提取次数和萃取次数；最后采用所选出的浸泡溶媒、浸泡时间、提取溶剂和萃取次数，利用响应表面法考察了微波功率、辐射时间、料液比和提取次数在微波辅助提取中对宋果灵提取率的影响。得到铁牛七中宋果灵的最佳提取工艺为：
传统溶剂回流提取法：1%氨水浸泡0.5 h后，5倍量氯仿提取3次，每次2 h，1% HCl萃取3次，10% NaOH中和，定容，测定。得到铁牛七中宋果灵含量为9.37 mg.g-1。
微波辅助提取法：1%氨水浸泡0.5 h后，在450 W下12倍量氯仿提取3次，每次9 min，1% HCl萃取3次，10% NaOH中和，定容，测定。得到铁牛七中宋果灵含量为9.26 mg.g-1。
对两种提取方法进行t检验，结果表明二者没有显著性差异，但微波辅助提取能大大缩短提取时间，而产率与传统溶剂回流提取相当。
2.3 亲脂性有机溶剂提取分离铁牛七化学成分
采用氯仿回流提取得脂溶性粗总碱，稀盐酸萃取后分为酸萃取液和氯仿层两部分，主要对氯仿层中亲酯性成分进行研究。无水乙醇溶解氯仿层后，溶液部分用快速中压液相制备色谱大孔吸附树脂进行初步分离。分别收集不同浓度乙醇洗脱液组分，其中，水洗所得A1部分含有大量糖份。用C-18柱进一步分离A1后，再用活性炭柱层析进行纯化。依次用水、10%、20%乙醇水溶液梯度洗脱，分别收集各洗脱峰。经过上述一系列复杂的分离纯化后，得到唯一一个纯化合物，命名为C1，经HR、1HNMR、13CNMR、2D谱和TOF-MS解析，出人意料的是，该化合物竟是亲水性的蔗糖，其原因有待于进一步探讨。