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一、名词解释

1． 米氏方程。

【答案】米氏方程是指表示一个酶促反应的起始速度（V ）与底物浓度（[S]）关系的动力学

方程它是在稳态理论基础上推导得出的。

2． 亲和层析、离子交换层析。

【答案】亲和层析是指利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的层析技术。

离子交换层析是指使用带有固定的带电基团的聚合树脂或凝胶层析柱分离离子化合物的层析方法。

3． 内含肽（inteinh

【答案】内含肽是指在蛋白质拼接过程中被切除的肽段。

4． 终止子

【答案】终止子

5． 抗原、抗体。

【答案】抗原是指凡能刺激动物机体产生抗体并能特异地与这种抗体结合的物质。

抗体又称免疫球蛋白，是一类特殊的蛋白质，也是机体内最复杂的分子，它以巨大的多样性识别着外部世界纷繁的抗原结构。

6． 最适温度。

【答案】酶反应的最适温度是指酶促反应过程中，当

度，酶促反应速度减小。

7． 胰岛素。

【答案】胰岛素是一种蛋白质激素，由胰腺的胰岛乙细胞分泌。它由A 、B 两条肽链，共51个氨基酸组成，并含有3个二硫键。胰岛素有十分广泛的调节细胞代谢的生物功能。主要作用部位在肌肉、肝脏和脂肪等组织。胰岛素能增加细胞膜的通透性，促进葡萄糖的氧化和储存，刺激蛋白质、脂肪以及核酸的合成。它还能促进细胞生长和分化。人的胰腺每日可产生1〜2mg 胰岛素，进食后其分泌量增加。体内缺少胰岛素会引起代谢障碍，特别是使细胞不能有效地利用葡萄

是分子中终止转录的核苷酸序列。 时的环境温度，高于和低于此温

糖，造成血液中葡萄糖含量高，过多的糖随尿排出；糖尿病即因此得名。

8． 螺旋。 【答案】螺旋是蛋白质中最常见的一种二级结构，肽链主链骨架围绕中心轴盘绕成螺旋状。

在螺旋结构中，每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈，每圈的高度为0.54nm 。每个氨基酸残基沿轴上升0.15nm ，沿轴旋转100°。在同一肽链内相邻的螺圈之间形成氢键，氢键的取向几乎与中心轴平行，氢键是由第n 个氨基酸残基的CO 基的氧与第

的。螺旋的稳定性靠氢键来维持。

个氨基酸残基的NH 基的氢之间形成二、问答题

9． 简要说明固氮酶的结构和功能，固氮酶对氮素固定作用的生化反应？

【答案】（1）固氮酶是一个多聚蛋白，由组分和组分组成。组分和两个乒乓亚基形成

该组分中含有4个结构，的相对分子质量为白由两个相对分子质量约

连接桥，一次连接桥和两个铁-钼辅助因子，所以常被称为铁钼蛋白。组分II 由两个两个亚基之间有一个完全相同的亚基组成，其相对分子质量约 为

（2）在固氮酶系统中，铁蛋白以只可传递一个电子，所以是生物固氮反应中的限速因素。该组分常被称为铁蛋白。 个分子与1分子铁-钼蛋白结合。在固氮过程中，铁蛋

的还原反应主白提供高还原能电子，所以又称还原酶，钼-铁蛋白是固氮酶系统中的固氮中心，

NADPH 是固氮酶系统中的还原辅因子，NADPH 要在钼-铁蛋白上进行。提供固氮反应所需电子，

需先将电子转移到一种铁氧还蛋白，再经还原 型铁氧还蛋白供给固氮酶系统所需之电子，固氮反应由ATP 提供能量，反应如下：

10．真核细胞的胞浆里的比数很低，而

故在胞浆中的比数很高。怎样理解这样的比值很高是有利

一个事实？试就动物体脂肪酸合成过程进行讨论。 【答案】

动物体内脂肪酸的合成需要

于脂肪酸的合成的。而的比值的调节则依赖于苹果酸的氧化脱羧，苹果酸在胞浆中的浓度的提高则有赖于草酰己酸在苹果酸脱氢酶的作用下，转化为苹果酸，与此同时也导致了胞浆里的比值的降低。

11．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？

如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？

你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的

种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条

小的条带。这一次染色方法是什么？为什么

会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？ 大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这

【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。

（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。

（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。

为了将的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，可使用凝胶过滤层析。的核糖核酸酶应该先流出来。

12．苯酚、有机憐农药和溴乙锭都对机体有害，请简要说明它们致害的原因。

【答案】苯酚是强有力的蛋白质变性剂。有机磷农药是强有力的丝氨酸蛋白酶抑制剂。溴乙锭可以插入DNA 中，改变DNA 结构，是强有力的模板抑制剂。

三、综合论述题

13．写出与谷氨酸代谢有关的所有途径。

【答案】以谷氨酸脱氢酶为中心的联合脱氨基作用。血氨转运中，Gin 合成酶催化Glu 与氨结合生成Gin , Gin 中性无毒，易透过细胞膜，是氨的主要运输形式。

Glc-Ala 循环途径，在肌肉中谷氨酸脱氢酶作用

下

接着在丙氨酸转氨酶作用

下

生物活性物质代谢途径，Glu 本身就是一种兴奋性神经递质，在脑、脊髓中广泛存在，Glu 脱羧形成的r 氨基丁酸是一种抑制性神经递质，在生物体中也广泛存在。

氨基酸合成途径，Glu 是合成Gin 、Pro 、Arg 、Lys 氨基酸的重要前体。

鸟氨酸循环（尿素合成）途径，在线粒体中，谷氨酸脱氢酶作用下为氨甲酰磷酸的合成提供游离的氨；在细胞质中在谷草转氨酶作用下，把氨基转移给草酰乙酸。后者形成天冬氨酸进入鸟氨酸循环，谷氨酸为循环问接提供第二个氨基。