● 摘要
癌基因是人类或其他动物固有的一类潜在活性基因,一旦激活,便能使人或动物发生癌变。在正常细胞中,一般以非激活形式存在,称为原癌基因(proto-oncogene)。目前有关癌基因的研究已不仅局限于肿瘤学,癌基因对正常细胞的生长、增殖、分化以及细胞内信息传递亦有重要意义。许多研究表明,精卵发生与诸多癌基因的表达密切相关。近年来,有关这方面的研究大多集中在脊椎动物,对无脊椎动物研究较少,在昆虫纲的直翅目蟋蟀总科中的研究尚属空白。在此,我们选取了两种原癌基因c-kit和c-myc,用免疫组织化学的方法对它们在黄脸油葫芦(teleogryllus emma)配子发生中的表达进行研究,通过其表达方式来了解原癌基因在昆虫精卵发生中的作用,并与其它动物相比较,了解其差异,为以后进一步研究提供理论依据。 首次运用免疫组化的方法对黄脸油葫芦精卵发生中原癌基因c-myc和c-kit 的表达进行了初步定位,结果表明,这两种原癌基因在黄脸油葫芦中都存在,而且都呈阶段性表达,只是表达部位及时间上具特异性。c-Kit蛋白在卵子发生中的卵原细胞上没有表达,在不同生长阶段卵母细胞的植物极的胞膜及胞质中表达,推断c-Kit蛋白在不同生长阶段卵母细胞中的表达可能与卵母细胞的极性产生有关。c-Kit 蛋白在黄脸油葫芦的精子发生中的精原细胞及精母细胞上为弱表达,而在精子细胞上表达水平较高,变形的精子上没有表达,推断c-Kit蛋白在精子细胞上的较高水平表达可能与精子细胞的减数分裂抑制有关。c-Myc蛋白在卵子发生中的阳性反应在细胞质中明显,细胞核中不明显,其中卵原细胞中没有表达,不同生长阶段的卵母细胞的胞质中有较高水平的表达,随着胞质中卵黄颗粒的产生,阳性信号逐渐减弱,推测卵原细胞增殖与c-Myc蛋白无关,而c-Myc蛋白在卵母细胞中的表达可能与卵母细胞的生长分化有关。c-Myc蛋白在黄脸油葫芦精子发生中的精母细胞上为弱表达,精子细胞上有较高水平的表达,精原细胞及变形的精子上没有发现阳性信号,推测c-Myc蛋白的这种表达方式可能与精子细胞的减数分裂抑制有关。 受精囊是雌雄昆虫个体交配后,雌体内贮存精子的地方,精子在受精囊内可以存活2~3个月,这其中的机理必定与受精囊的特殊结构密切相关。本文采用常规石蜡切片的方法,在光镜下对黄脸油葫芦的受精囊及受精囊管进行了观察,了解了其基本组织结构,为进一步研究受精囊保存精子和释放精子的机理奠定理论基础。结果发现,受精囊是一椭圆形的囊状结构,外被受精囊壁,内为受精囊腔。受精囊壁主要是由腺细胞和肌肉组成,受精囊的囊壁结构由内向外可分为以下几部分:内膜层、腺细胞层、基膜层、肌肉层、围脏膜层。受精囊作为雌虫贮藏精子的地方,精子在其内可以存活几个月,这种长期贮存精子的能力,对一生只交配几次的雌虫来说,可保证在不同时期成熟和排放的卵都能受精。通过对黄脸油葫芦受精囊结构的探讨,不仅可以为研究影响精子活力的因素提供了一定的理论依据,而且对精子保存方法的改进也可能发挥重要的作用。