题目：杏鲍菇多糖的分离纯化及其抗氧化和抗肿瘤的功能研究

     目前，食用菌多糖的研究已经成为国内外的热点，研究表明多糖是食用菌中的最有价值活性成分之一，具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖和增强免疫力等生物活性 。 杏 鲍 菇 （ Pleurotus  eryngii ） ， 学 名 刺 芹 侧 耳 ， 为 担 子 菌 类 侧 耳 科
（Pleurotaceae）侧耳属，属于食用菇菌类。
本文着重考察了杏鲍菇多糖纯化后的体外抗氧化、抗肿瘤活性，阐明了杏鲍菇多糖清除自由基以及抗肿瘤细胞的机制，为杏鲍菇多糖的开发应用提供了理论基础及技术支持。
    研究采用水提醇沉法来提取杏鲍菇中的粗多糖，提取率为 5.4%，多糖总糖含量为 61.3%。再经过对杏鲍菇粗多糖进行 Sevag 除蛋白、活性炭吸附脱色处理，最终得到无色脱蛋白杏鲍菇粗多糖。通过 HPLC-UV 检测技术来分析杏鲍菇粗多糖（PEP）的单糖组成，结果显示，PEP 由 8 种单糖组成：甘露糖（9.8%）、核糖（1.6%）、鼠李糖（0.15%）、葡萄糖醛酸（0.8%）、葡萄糖（62.8%）、木糖
（0.05%）、半乳糖（24.4%）、海藻糖（0.4%），其中葡萄糖、半乳糖以及甘露糖含量较多。由此说明，PEP 是由 8 个单糖组分组成的杂多糖。通过一系列自由基的抗氧化实验，系统评价了的杏鲍菇多糖 PEP 的体外抗氧化能力，表明 PEP具有一定的体外抗氧化活性，并且呈现出较好的剂量依赖效应。
    对杏鲍菇粗多糖进行 DEAE-52 纤维素柱层析，并采用 G-100 葡聚糖凝胶层析柱对得到的多糖组分进行进一步的纯化，DEAE-52 纤维素柱层析洗脱后得到 2种多糖组分且均为均一的组分，分别命名为 PEP-1、PEP-2。紫外扫描结果显示，260-280  nm 之间并没有吸收峰，表明 PEP-1、PEP-2 中不含核酸和蛋白质。红外光谱结果表明，在 PEP-1、PEP-2 的结构中均存在吡喃糖环结构。通过 HPLC-UV对 PEP-1、PEP-2 的单糖组成进行进一步的检测，结果显示，组成 PEP-1 的单糖有甘露糖（mannose）、葡萄糖（glucose）以及半乳糖（galactose），组成 PEP-2的单糖同样为甘露糖（mannose）、葡萄糖（glucose）以及半乳糖（galactose）。经过高效液相凝胶渗透色谱分析，得到 PEP-1、PEP-2 的分子量分别为 25362Da，463396 Da。
    通过 MTT、LDH 实验可以得知，与 PEP-1 相比，PEP-2 对人肝癌细胞HepG2 有明显的抑制增长作用，且与浓度呈量效关系。DAPI 染色发现，这些凋亡使细胞出现了染色质凝集，核碎裂和调亡小体出现等特征。Annexin  V-FITC/PI检测 PEP-2 引起的凋亡结果显示，经 PEP-2 处理的细胞在 6  h 之后，就出现了20.49% 的早期凋亡，晚期凋亡占到 4.27% ；而在 24  h 后，早期凋亡达到35.71%，晚期凋亡也增加到了 20.63%，由流式细胞仪检测得出，PEP-2 将人肝癌
细胞 HepG2 的生长阻滞在了 S 期。
    利用流式细胞仪检测 PEP-2 诱导的 HepG2 细胞的活性氧水平，结果显示，随着作用时间的增长，细胞内 H2O2 水平即得到了明显的升高，因此初步推断，在 PEP-2 发挥抗肿瘤作用的时候，ROS 起到了介导细胞凋亡的作用。
    本实验从杏鲍菇中提取分离纯化得到 2 种多糖组分，并对其结构进行了初步的检测与观察，并筛选得到一种组分 PEP-2（分子量为 46 WDa）具有显著的抑制肝癌细胞的增殖作用，其中 ROS 在过程中起到了介导凋亡的作用。这一研究发现对研究多糖的抗肿瘤的机制指明了思考的方向，并为功能性食品因子或药物的开发提供了理论依据。