题目：表达血小板膜糖蛋白GPIb-IX复合物细胞株的建立及其应用探讨

目的：血小板膜糖蛋白Ib-IX（Glycoprotein Ib-IX, GPIb-IX）复合物对血小板止血功能的发挥具有重要意义。本文旨在建立表达血小板膜糖蛋白GPIb-IX复合物的中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）细胞野生型和突变型细胞模型，研究探讨细胞株建立的方法及其对研究GPIb-IX复合物功能的应用价值。方法：抽提表达GPIb alpha基因的野生型和突变型表达质粒，并进行鉴定。将表达GPIb alpha、GPIb beta和GPIX基因的三种质粒共转染CHO细胞，通过Western Blotting和流式细胞仪检测细胞转染结果，通过细胞分选收集阳性细胞。通过免疫共沉淀检测CHO细胞株中野生型和突变型GPIb alpha与14-3-3ζ结合的情况，通过激光共聚焦显微镜观察野生型和突变型GPIb alpha在CHO细胞株中的分布情况。结果：质粒鉴定结果表明，表达质粒中包含野生型和突变型GPIb alpha基因，Western Blotting和流式细胞仪检测结果证明，我们成功建立了表达野生型（Ib9）和突变型（△551）血小板膜糖蛋白GPIb-IX复合物的CHO细胞模型。免疫共沉淀结果显示Ib9细胞株中GPIb alpha能够与14-3-3ζ蛋白结合，而△551细胞株中GPIb alpha不能和14-3-3ζ蛋白结合。在包被有VWF的基质表面，botrocetin刺激的△551细胞铺展范围比Ib9细胞面积更大。结论：成功构建表达血小板膜糖蛋白GPIb-IX复合物的细胞模型。GPIb alpha 膜内C端551位点之后氨基酸的缺失会导致GPIb alpha不与14-3-3ζ蛋白结合，而增加VWF与GPIb-IX复合物的结合。结果表明，我们建立的细胞株可用于GPIb-IX生理功能的研究。