● 摘要
目的：血液流动条件下，血小板膜糖蛋白Ibα（GPIbα）与受损伤的血管壁处血管性血友病因子（VWF）的结合，使得血小板粘附、聚集并形成血栓。血小板GPIbα胞外部分的酶切是血小板功能的重要调节机制。本文旨在研究流体剪切力是否能诱导GPIbα的胞外部分从血小板膜表面被酶切。方法：建立血小板流动腔检测模型。洗涤血小板悬液，在一定剪切率下流过VWF包被的毛细玻璃管，或在锥板粘度计中经受一定时间的剪切作用。使用流式细胞术检测血小板膜表面GPIbα的表达量和血小板的活化程度；使用抗GPIbα N端和C端的抗体，通过western blot分别检测GPIbα N端和C端的酶切情况；通过血小板活化抑制剂和一些蛋白酶抑制剂，研究血小板活化和蛋白酶等因素在剪切力诱导的GPIbα酶切中的作用机制。结果：血小板在经过所建立的流动腔作用之后，GPIbα的胞外部分减少，同时在胞内部分产生一个分子量为17kDa左右的小片段，该小片段随着GPIbα胞外部分的减少而增多。GPIbα胞外部分被酶切的程度，随着包被的VWF的浓度的升高和剪切力作用时间的延长而加强，但随剪切力大小的增加而减弱。western blot和流式细胞术的结果显示，剪切力诱导的GPIbα酶切与整合素αIIbβ3和血小板的活化无关。此外，可穿膜的calpain抑制剂和metalloproteinase抑制剂可有效地抑制剪切力诱导的血小板GPIbα的酶切。结论：成功建立血小板流动腔检测模型。研究表明，流动条件下血小板与VWF的相互作用，可引起calpain和metalloproteinase调控的 GPIbα的酶切。这一新的GPIbα酶切机制的发现，对认识血小板在血栓形成中的生理调控机制具有重要价值。