2018年军事医学科学院军事兽医研究所710生物综合之生物化学考研基础五套测试题
● 摘要
一、名词解释
1． 可逆沉淀反应。
【答案】可逆沉淀反应，又称不变性沉淀，是指在发生沉淀反应时，蛋白质虽已析出，但是其分子内部结构未发生显著变化，沉淀因素去除后，能再溶于原来的溶剂中的沉淀反应，如盐析作用。
2． 位点特异性重组（site-specific recombination）。
【答案】位点特异性重组是指发生在DNA 特异性位点上的重组。
3． 后随链（lagging strand）。
【答案】后随链是指DNA 半不连续复制过程中，延伸方向与复制叉前进方向相反、由合成的一系列短的DNA 片段（冈崎片段）连接而成的新生链。
4．
切除修复
【答案】
切除修复又称核苷酸外切修复，是一种恢复紫外线等辐射物质所造成的损伤部位的暗修复系统。此系统是在几种酶的协同作用下，先在损伤的任一端打开磷酸二酯键，然后外切掉一段寡核苷酸，留下的缺口由修复性合成来填补，再由连接酶将其连接起来。
5． 异肽键。
【答案】异肽键（isopeptide bond）是指两个氨基酸通过侧链羧基或侧链氨基形成的肽键。
6． 两性离子。
【答案】两性离子是指同一分子上带有等量正负电荷时，分子所处的状态。
7． 多酶复合体。
【答案】多酶复合体是指多种酶靠非共价键相互嵌合、催化连续反应的体系。
8． DNA 聚合酶（DNA polymerase）。
【答案】DNA 聚合酶是指以DNA 为模板，催化核苷酸残基加到已存在
的聚核苷酸
某些DNA 聚合酶具有外切核酸酶的活性，可用来校正新合成的核苷酸的序列。
二、问答题
9． 有一多肽，其分子量约为1200。将其多肽进行如下分析：
（1）进行氨基酸成分分析可知含有等摩尔的Leu 、Orn 、Phe 、Pro 和Val 。
（2）羧肽酶处理时，无游离氨基酸。
（3）经DNFB
处理得到
根据以上的实验结果推（4）该肽不被胰凝乳蛋白酶水解。 （5）该肽部分水解得到下列三种二肽，即
导出该肽的 氨基酸顺序，并说明理由。
【答案】由（1）可得该多肽为十肽；由（2）可得该肽可能为环肽，也可能末位或倒数第二位氨基酸为Pro ; 由 （3）可得该肽为线性结构，N 端为Orn ; 由（4）可得Phe 应在Pro 前一位；
由（5
）可得该十肽顺序为
10．常见的呼吸链电子传递抑制剂有哪些？它们的作用机制是什么？
【答案】（1）鱼藤酮（rotenone ）、阿米妥（amytal ）以及杀粉蝶菌素A （piericidin-A ）, 它们的作用是阻断电子由NADH 向辅酶Q 的传递。鱼藤酮是从热带植物（Deni?e/Z中rica ）的根中提取出来的化合物，它能和NADH 脱氢酶牢固结合，因而能阻断呼吸链的电子传递。鱼藤酮对黄素蛋白不起作用，所以鱼藤酮可以用来鉴别NADH
呼吸链与
相竞争，从而抑制电子传递。
（2）抗霉素A （antimycin A）是从链霉菌分离出的抗菌素，它抑制电子从细胞色素b 到细胞
色素的传递作用。
（3）氰化物、一氧化碳、
叠氮化合物及硫化氢可以阻断电子由细胞色素
这也就是氰化物及一氧化碳中毒的原因。
11．为什么同源重组只发生在相同或几乎相同DNA 之间？
【答案】催化链交换反应的酶只能识别顺序高度相似的区域，并启动三链中间物的形成。在该中间物中，侵入的链与互补链进行碱基配对。如果两种DNA 分子的顺序不同，这种配对则是不可能实现的。
12．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？
如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？
你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的大小的条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这
呼吸链。阿米妥的作用与鱼藤酮相似，但作用较弱，可用作麻醉药。杀粉蝶菌素A 是辅酶Q 的结构类似物，由此可以与辅酶Q 向氧的传递作用，
种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条
小的条带。这一次染色方法是什么？为什么
会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？ 大
【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。
（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。
（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。
为了将
的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，
可使用凝胶过滤层析。的核糖核酸酶应该先流出来。
13．简要说明嘌呤和嘧啶核苷酸合成的调节。
【答案】（1）嘌呤核苷酸合成的调节：①催化嘌呤核苷酸合成的磷酸核糖焦磷酸（PRPP ）转酰胺酶是一个变构 酶，受AMP 和GMP 的反馈抑制；②催化次黄嘌呤核苷酸（IMP ）氧化成黄嘌呤核苷酸（XMP ）的次黄嘌呤核 苷酸脱氢酶，其活性受过量GMP 的抑制；③在GTP 供能的条件下，催化次黄嘌呤核苷酸（IMP ）与天冬氨酸生 成腺苷酸琥珀酸（SAMP ）的腺苷酸玻珀酸合成酶，受过量AMP 的抑制。
（2）嘧啶核苷酸合成的调节：①氨甲酰磷酸合成酶II （CPS-II ）受UMP 的反馈抑制；②天冬氨酸转氨甲酰酶（A TCase ）是别构酶，受A TP 的正调控和CTP 的负调控；③CTP 合成酶受产物CTP 的负调控。
14．提高天冬氨酸和谷氨酸的合成会对TCA 循环产生何种影响？细胞会怎样应付这种状况？
【答案】提高天冬氨酸和谷氨酸的合成，将会减少草酰乙酸和旷酮戊二酸的量。如果这两种物质不能被有效的补充，将会影响到TCA 循环，进而影响乙酰CoA 的氧化和ATP 的合成。然而体内存在的一系列的回补反应可及时补充草酰乙酸和or 酮戊二酸的量。
15．以不同浓度的丙酮酸为底物，测定乳酸脱氢酶酶促反应速度得到以下一些数据（见表）:
表