题目：银线草与多穗金粟兰提取物的抑菌活性分析

银线草（Chloranthus japonicus Sieb.）和多穗金粟兰（Chloranthus multistachys Pei）为金粟兰科（Chloranthaceae）金粟兰属（Chloranthuus）植物，为民间传统的常用草药，以根、根茎或全草入药，常用于治疗跌打损伤、风湿疼痛、毒蛇咬伤等症状。近年来对其化学成分的研究逐渐增多，目前据文献报道它们有抗菌、抗肿瘤、抗炎等作用，但其抑菌的机制鲜见报道。本研究主要比较和分析银线草和多穗金粟兰提取物的抑菌活性，确定其抑菌的有效部位，并初步探讨其抑菌机制。论文的主要研究结果如下：
1. 银线草和多穗金粟兰抑菌活性分析 用甲醇分别提取银线草和多穗金粟兰，得到的甲醇提取物再依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到不同溶剂的萃取物。采用牛津杯法和96孔板法测定银线草和多穗金粟兰各个萃取物的抑菌圈及其MIC与MBC。实验结果表明，银线草和多穗金粟兰提取物对8种革兰氏阳性菌、2种革兰氏阴性菌和3种酵母菌均有不同程度的抑制和灭活作用。其中，银线草和多穗金粟兰提取物对细菌较敏感，特别是藤黄八叠球菌，而对酵母菌抑制作用不明显。银线草和多穗金粟兰的乙酸乙酯萃取物表现出良好的抑菌活性，对藤黄八叠球菌的抑菌圈分别为16.22±0.25 mm和15.11±0.28 mm，MIC值分别为0.98 mg/mL和1.56 mg/mL，MBC值相同，均为6.25 mg/mL。
2. 以银线草和多穗金粟兰乙酸乙酯萃取物（分别为Y1和D1）为材料，大肠杆菌为指示菌，对抑菌机制进行初步探究：
(1) Y1和D1对大肠杆菌生长曲线影响的结果显示，Y1和D1均明显抑制了大肠杆菌的生长和繁殖，处理后0～6h之间生长都很缓慢，之后出现短暂的快速生长，并且比对照组提前进入衰亡阶段。推断银线草和多穗金粟兰的抑菌有效成分可能影响了大肠杆菌在对数生长期的生长。
(2) Y1和D1对大肠杆菌细胞通透性影响的结果表明，Y1和D1破坏了大肠杆菌的细胞壁结构，导致细胞壁的通透性增大，使菌体壁膜间隙的AKP泄漏至胞外，检测到AKP开始呈缓慢增长趋势，3～5h之间，菌体泄漏出的AKP量显著增长，5h时达到最大值。
(3) Y1和D1对大肠杆菌细胞内琥珀酸脱氢酶（SDH）活性影响的结果表明，Y1和D1影响并降低大肠杆菌体内SDH的活性，进而阻碍和减缓了大肠杆菌的呼吸氧化作用及能量代谢。其中，Y1和D1处理组的SDH活性分别为13.44±3.04 U/mgprot和15.10±2.31 U/mgprot，Y1对SDH的干扰更大。
(4) SDS-PAGE电泳图谱显示，Y1和D1处理后的大肠杆菌，其蛋白电泳谱带与对照组相比，变浅甚至消失，此实验结果表明Y1和D1干扰相关蛋白的合成与表达，且对小分子蛋白的抑制作用更为明显。
(5) 环境扫描电镜与透射电镜的观察结果表明，经Y1和D1处理后大肠杆菌，其细胞表面变得模糊不清，有塌陷且相互粘连。菌体内部细胞质固缩，变得不均匀，有的细胞内物质已完全解体，出现了空腔，这说明菌体细胞被破坏。
本论文说明银线草和多穗金粟兰提取物具有一定的抑菌作用，对菌体细胞的通透性、呼吸代谢、蛋白表达均有一定抑制作用，推断其抑菌作用可能是通过破坏菌体细胞壁而产生的。作为天然的抑菌物质，有其更广阔的应用前景。