题目：旋转培养模拟微重力对K562细胞增殖的抑制作用

目的 在航天飞行条件下航天员会出现“航天飞行性贫血”，其分子机制尚不明确，实验观察了NASA旋转式细胞培养系统（RCCS）模拟的微重力环境对K562细胞增殖的影响。 方法 利用NASA旋转式细胞培养系统（RCCS）模拟的微重力环境，将起始浓度为3.0×104cells/ml 的K562细胞置入RCCS细胞培养装置内以15rpm旋转培养，同时设地面对照。细胞计数分析K562细胞增殖情况；Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒以及流式细胞术检测K562细胞凋亡；碘化苯啶（PI）染色和流式细胞术分析细胞周期分布情况；免疫荧光标记和细胞流式术检测细胞周期变化和细胞周期蛋白A，B1，D1，E的表达；以及应用荧光染料FITC标记的鬼笔环肽和荧光染料罗丹明标记的微管蛋白抗体，在激光共聚焦显微镜下分别观察细胞微丝和微管结构。 结果 RCCS培养的K562细胞的细胞数量在24h，48h，72h和96h实验时间点细胞数量为(4.79±0.07)×104，(10.50±3.57)×104，(26.46±8.34)×104，(50.72±6.31)×104 cells/ml，显著低于地面对照组在同样实验时间点的数量(8.78±1.26)×104， (19.33±1.26)×104，(39.38±2.73)×104，(76.35±5.92)×104 cells/ml，但各时间点K562细胞没有出现大量凋亡的现象，死亡率均小于7%；RCCS培养的实验组S期细胞比例比地面对照组明显增多(58.04% vs 47.40%)，G2/M期(14.62% vs 16.36%) 和G0/G1(27.34% vs 36.25%)期细胞比例低于地面对照组；RCCS环境下细胞培养12h时，细胞的细胞周期蛋白A与地面对照相比较表达明显降低，细胞周期蛋白B1、D1和E与地面对照相比较表达升高，而在24h和36h逐步恢复到与地面对照组一致；在RCCS培养条件下K562细胞微丝与地面对照相比，微丝的分布在12h和24h时候均有明显变化，微丝集中聚集于细胞的膜内表面，细胞质内的分布减少，并且不呈纤维状分布，且分布不均匀；微管纤维缩短、聚集、缺少分支，微管组织中心结构也发生了改变。 结论 这些结果表明，RCCS培养模拟微重力环境能抑制K562细胞的增殖，延长细胞周期，改变和破坏细胞骨架结构，从而影响细胞正常生长。