● 摘要
白藜芦醇是一种多酚类化合物，广泛存在于多种植物中。由于其具有抗癌、抗氧化、雌激素调节、抗菌消炎和预防心血管疾病等多方面的药理作用，含有白藜芦醇的功能性食品深受欢迎，市场需求很大。目前，从植物资源中提取和分离纯化白藜芦醇的研究越来越受到人们的关注。在国外，主要从葡萄和葡萄籽中提取白藜芦醇，国内主要以中药虎杖为原料进行提取，但都面临提取所用的植物原料匮乏、成本高等问题。据报道，在葡萄的多个组织中都含有白藜芦醇，如葡萄皮、葡萄籽和葡萄叶等。我国葡萄资源丰富，但对葡萄叶的利用不足，仅有极少部分用于饲料或食物辅料，其余则作为废弃物自然分解或燃烧，这不但浪费了农业资源，而且造成了环境污染。因此，研究和开发葡萄叶中的白藜芦醇对扩大白藜芦醇的植物来源及提高葡萄相关产品的经济价值具有重要意义。
本论文以葡萄叶为原料，对葡萄叶中白藜芦醇的含量分析方法、提取工艺及分离纯化等进行研究，为葡萄叶的开发利用提供依据。主要内容如下：
（1）建立了以乙腈—水为体系，梯度洗脱方式分析葡萄叶中白藜芦醇含量的HPLC方法。方法学考察表明：该方法准确、可靠，可用于定量测定，并可为后续实验提供快速的检测。有文献采用紫外分光光度法分析提取物中的白藜芦醇，但HPLC检测时发现，葡萄叶提取样品在5 min前有一较大的杂质峰，且该峰的面积明显高于所检测的白藜芦醇的峰面积，因此紫外分光光度法不能准确测定白藜芦醇的含量。本研究采用HPLC方法，分析了西安附近5种葡萄品种的葡萄叶中的白藜芦醇含量。结果表明：“户太八号”葡萄叶中的白藜芦醇含量在各月份都相对较高，在10月份尤其高，可达41.08 μg/g。在不同的生长月份，葡萄叶中的白藜芦醇含量也不同，其变化趋势为：5月、6月和7月，所测各品种（除“藤稔”外）的葡萄叶中白藜芦醇含量呈增加趋势，到8月葡萄成熟时，白藜芦醇含量有所下降，而到10月叶片脱落前一段时间，其含量大幅增加。说明葡萄被采收后的叶片可用于提取白藜芦醇。
（2）采用HPLC法测定白藜芦醇含量，研究葡萄叶中白藜芦醇的溶剂提取方法，并对提取工艺进行优化。本文采用乙醇浸提法提取白藜芦醇，以提取物中的白藜芦醇含量为考察指标，在单因素实验的基础上，采用响应面方法对乙醇体积分数、液固比和浸提温度等因素进行优化。优化工艺参数为：乙醇体积分数46%，液固比23 mL/g，温度62℃，时间60 min，提取3次，在该工艺条件下，白藜芦醇的实际提取量可达47.96 μg/g。
（3）采用大孔吸附树脂纯化白藜芦醇，综合考虑7种大孔树脂和3种聚酰胺树脂的吸附率与解吸率后，确定用HPD450A树脂进行动态柱层析，对白藜芦醇作进一步的纯化。所确定的柱层析条件为：上样速率为1.0 mL/min，充分吸附后，先以30%的乙醇3 BV洗脱除去极性大的杂质，再以95%的乙醇5 BV洗脱，洗脱流速为1.0 mL/min。在萃取法结合柱层析纯化中，使用石油醚可去除部分杂质，在对白藜芦醇初步除杂后，再经柱层析进一步纯化，白藜芦醇得率为5 mg/100g，含量为13.7%。
虽然葡萄叶中白藜芦醇含量不高，但资源丰富，有必要从原料干燥、存放条件、实验设计和操作等多方面考虑，进一步研究从葡萄叶分离纯化白藜芦醇的工艺条件。